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蛋白质相互作用检测试验

我们采用分裂荧光素酶互补试验作为实验系统,其原理来源于发光叩头虫的独特荧光素酶(祖母绿荧光素酶,E-Luc),该试验方法是研究蛋白质相互作用(PPI)的一种极具价值的工具。这套实验系统操作简易,灵敏度高,能够检测包括GPCR在内的各类PPI。

除列表上已建立的细胞株外,我们还提供适合检测的定制稳定转染细胞株开发服务,任何您感兴趣的特定PPI皆可检测!

分割萤光素酶技术

相比传统的萤火虫荧光素酶而言,E-Luc发光更亮,信号更加稳定。荧光素酶的N端和C端结构域可以分离成两个片段,并且可以在细胞中重新结合。当融合报告蛋白的两个片段被带到附近时,它们会自发地重新折叠并产生可检测的信号(已取得专利)。


Pyrearinus termitilluminans and Bioluminescence
Photo Credit: Courtesy of Dr. Yoshihiro Ohmiya, The National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST)
Ligand; DAMGO, 10μM

Ligand; DAMGO, 10μM/
Antagonist; Diprenorphine, 0.1μM

在存在或不存在二丙诺啡的情况下,DAMGO刺激共表达于HEK293细胞的ORPM1-Eluc-C和ELucN-b-arrstin 1

应用于GPCR

分裂荧光素酶的N端和C端片段分别与β-arrestin和GPCR融合。配体与GPCR的结合触发GPCR的磷酸化,从而诱导其与β-arrestin的相互作用。这种相互作用使N末端荧光素酶与C末端荧光素酶接近,且可测量生物发光活性。

RAF二聚化定制测定服务

为满足不同的研究目的,我们现为您提供单独定制的RAF二聚化检测服务,以了解化合物对任何或所有5种亚型对BRAF/BRAF、BRAF/BRAF[V600E]、CRAF/BRAF、CRAF/BRAF[V600E]、CRAF/BRAF[V600E]、CRAF/CRAF的影响。评估抑制剂促进的RAF二聚化,为了解抑制剂诱导二聚化的机制提供线索。在配体诱导RAF二聚化的试验中定量化合物的抑制活性同样也成为可能。

RAF二聚化定制测定服务

(a)使用分割荧光素酶探针对RAF抑制剂诱导的RAF二聚体进行定量分析

(b)RAF抑制剂促进RAF二聚化的时程测量

(c)PLX7904抑制RAF二聚体的定量分析