カイネティクス測定 フォスファターゼアッセイPhosphoSens™ キット & 基質製品
蛋白質の脱リン酸化反応はリン酸化反応と同様に細胞の増殖・分化などに関わる重要な制御機構であり、プロティンフォスファターゼは多くの細胞内シグナル伝達系において重要な役割を担っています。Mg2+をキレーティングすることで蛍光を発する(Chelation-enhanced fluorescence:CHEF)Sulfonamido-Oxine(Sox) をペプチドなどの基質に結合させ、キナーゼによる基質のリン酸化を蛍光強度の増加として経時的に検出することを可能にしたものがPhosphoSens™技術ですが、この技術を応用することによってフォスファターゼの脱リン酸化を継時的に測定することが可能です。
脱リン酸化反応を簡単にモニターできるように最適化した試薬及びPhosphoSens™基質を備えたアッセイキットを用いれば、試薬を混合して測定するだけの簡単な操作で、Km, Vmax, kcat, IC50, Kinact, Kon, Koff,Residence Time等々ご要望に応じた幅広いデータを取得頂けます。継続してキットご使用をご希望の場合には、追加でPhosphoSens™リン酸化基質をはじめ別売りの試薬をご購入頂く事でアッセイをスケールアップして頂けます。本製品についての詳細やリスト外のターゲットのご相談などお気軽にお問合せ下さい。
技術概要
Chelation-enhanced fluorescence using the sulfonamido-oxine (Sox) chromophore
あらかじめリン酸基を結合させたCsox結合基質にMg2+ を添加すると、基質のリン酸基とCsoxによってMg2+ がキレーティングされ、蛍光(Chelation-enhanced fluorescence:CHEF)を発します。ここにフォスファターゼを加えると、基質の脱リン酸化が誘導さると共にMg2+ に対する基質の親和性が減少し蛍光が消失していくため、蛍光強度の変化を継時的に測定することで、フォスファターゼによる基質の脱リン酸化をモニターできます。
測定データサンプル
（経時/エンドポイント測定用）
ATP 溶液
DTT 溶液
リアクションバッファー
希釈バッファー
EGTA （経時測定用のみ）
ユーロピウム （エンドポイント測定用のみ）
（試薬はセット提供のみ）
DTT 溶液
リアクションバッファー
希釈バッファー
EGTA （経時測定用のみ）
ユーロピウム （エンドポイント測定用のみ）
