カルナバイオサイエンス株式会社

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ResidenceTimer™
キナーゼ蛋白質
相互作用解析サービス

ResidenceTimer™ はカルナバイオサイエンス提供のビオチン化キナーゼタンパク質等を用い、SPR(表面プラズモン共鳴)法による化合物とキナーゼ蛋白質の相互作用を速度論的に解析するサービスです。分子間相互作用検出用に開発された高感度SPR機器、Biacore T200 (Cytiva)を用いて経時的に観察したアフィニティーセンサーグラムから2分子間の結合特異性を確認、結合親和性をカイネティクス解析致します。

生物学的アッセイだけでは知りえない物理化学的な情報を得ることは化合物の真の特徴を知るうえでとても重要です。
市販されている薬剤の中には、標的分子との結合時間が長いために、血漿中からの消失半減期よりも長く標的分子に作用し、酵素アッセイで得られたIC50やKDから推測されるよりも強い効果を示す化合物があることが知られています。本サービスでの測定はn=2以上5濃度で行われ、化合物の結合速度定数(Ka)、解離速度定数(Kd)、解離定数(KD=Kd/Ka)、residence time (τ =1/Kd) をパラメーターとした測定結果をご報告致します。ATPバインディングポケット結合化合物のみならず、アロステリック効果をしめす非ATPバインディングポケット結合化合物にも対応します。

Oncolines社提供のSPR測定の優位点

  • センサーチップへの固相化が難しいターゲットも多数評価済み (リストに無いターゲットについてもご相談ください)
  • ビオチン化蛋白質を用いての測定では、ビオチン分子一つだけがラベリングされたビオチン化キナーゼによるばらつきの無い固相化で非特異な相互作用を軽減(Oncolines社測定データサンプルを当社ビオチン化タンパク質製品ページでご覧いただけます)。
  • ターゲットを中性PHで固相化することによりキナーゼタンパク質の活性低下軽減を実現
  • 全ての試験が均一バッファーで行われる為ターゲット間の比較評価が容易

NVP-BGJ398に対するFGFR 1,3,4のシングルカイネティクスカーブ
異なるサブタイプに対する結合・解離の違いを知る事ができる

Ponatinibに対する酵素アッセイ結果とResidence Time測定結果の相関性
同程度のIC50値を示すターゲット間ではResidence Timeを測定することにより、化合物のターゲットに対する真の結合能を見極めることができる

  • センサー表面に固相化されたキナーゼ蛋白質への結合だけを検出でき、バックグラウンドノイズが少ない高感度検出
  • シングルサイクルカイネティクス解析法でリガンドとなるキナーゼタンパク質の活性低下軽減
  • センサー表面で起こる屈折率の変化をリアルタイムに検出
  • 屈折率の変化を検出するので、標識などを不要としたダイレクト検出
  • センサー表面からのごく狭い範囲内のターゲット分子の変化だけを読み取る為、少量の化合物で測定OK

関連論文
Compound Selectivity and Target Residence Time of Kinase Inhibitors Studied with Surface Plasmon Resonance

Oncolines社
Oncolines B.V. (旧 Netherlands Translational Research Center B.V., NTRC) について
Oncolines B.V.は「Helping to Bring Improved and Novel Therapies to the Right Patient Population Faster」をミッションとし、オランダ・Oss市にある中核的研究施設内の拠点から世界中の製薬・バイオテック企業へ低分子阻害剤創薬の支援を提供する企業です。長年国際的メガファーマで創薬研究の経験と実績を積み重ねた創始メンバーに加えデータ解析等で卓越した専門技術を備えたエキスパートで構成されており、お客様の候補薬剤の特徴、活性、選択性の見極め、他の薬剤との差別化を質の高い一連のサービスでサポート致します。