E-Lucは，従来より用いられているホタルルシフェラーゼと比べ安定で、強いシグナルを出すことが知られています。このルシフェラーゼを2つのフラグメントに分解（スプリット）し、それぞれを細胞内に導入すると、自然界にはない2つのルシフェラーゼのタンパク質断片が生成されます。細胞内でこれらの２つのフラグメントが会合することによって高感度の発光シグナルが発生いたします（特許取得済み）。技術詳細につきましては、F.A.Q.をご参照、またはお問合せ下さい。

リガンドがGPCRに結合すると、細胞内ドメインにβ-アレスチンがリクルートされ、その下流にシグナルが伝達されていきます。当社では下図に示しますように、GPCRにEmerald-LucのC-末部分を、β-アレスチンに同N-末部分を結合させた遺伝子を細胞内で同時に発現させ、リガンドのGPCRへの結合をスプリットルシフェラーゼで検出するアッセイ系を構築しております（安定発現株リスト）。この方法はGPCRに広く応用でき、スプリットルシフェラーゼとお客様ご希望のGPCRおよびβ-アレスチンのフュージョンタンパクを安定発現させた細胞株の樹立を承ります。価格など詳細についてはお気軽にお問合せください。

BRAF/BRAF, BRAF/BRAF[V600E], CRAF/BRAF, CRAF/BRAF[V600E], CRAF/CRAF 5種類の組み合わせアッセイでご要望に合わせてカスタマイズされたRAF 二量体化に対する化合物評価試験を受託致します。これらのアッセイでは、RAFの二量体化を誘導する化合物の誘導評価が可能です。また、リガンドによって二量体化を誘導し、その作用を化合物が阻害するかどうかを定量的に測定することも出来ます。

(a) スプリットルシフェラーゼ技術を用いた阻害剤誘導による二量体化定量評価

(b) RAF阻害剤によって促進された二量体化の経時測定

(c) PLX7904によるRAF二量体化の阻害定量評価

関連論文はこちらから

連載エッセイ～Elucをめぐる旅の物語～